臨床生物化學(xué)/方法建立的原理確定

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臨床生物化學(xué)

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臨床生化方法按其傳統(tǒng)分類可分為光譜法、層析法電泳法、酶法、電化學(xué)法、分子生物學(xué)免疫化學(xué)法等,這些方法的建立首先要根據(jù)其技術(shù)的原理(詳見前面有關(guān)章節(jié))和被測物質(zhì)的物理化學(xué)性質(zhì)來確定其方法建立的原理,例如亮度法測定的對象是各種有色物質(zhì),有色物質(zhì)溶液的顏色深淺與其濃度有一定的關(guān)系,濃度大時色深,濃度小時色淺,比較顏色的深淺即可測知待測物質(zhì)的濃度。為此,首先要知道待測物質(zhì)本身是否有色,若本身無色,能與何種物質(zhì)在什么條件下呈色,弄清后即可與一已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作比較,然后分別測出兩者的吸亮度,從郎伯-比耳定律可得知:

Goqpa0zd.jpg


由于分析的物質(zhì)相同,處理也一樣,故K值相同,再因為測定時用同樣比色皿(L1=L2),所以光度法中測得未知液與標(biāo)準(zhǔn)液吸光度的比值就等于其濃度的比值。(A1/A2=C1/C2)。如C1為未知物濃度,則可得到計算公式如下:

C1=A1×C2/A2

只要再乘以測定時標(biāo)本的稀釋倍數(shù),即為通常光度法測定的通用的計算公式,但此公式只有在測定時空白管為零的條件下才適用。

32 臨床生化方法的建立 | 方法建立時的條件選擇 32
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