核糖核酸酶A

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核糖核酸酶A [RNase A]

核糖核酸酶A是內(nèi)切核糖核酸酶,可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3'端,切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3'磷酸及末端帶嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。無輔因子及二價陽離子存在時,核糖核酸酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al.1982)所抑制。

用途

(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。

(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985,Winter et al.1985)。 在此方法中,RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯配可被RNA酶A識別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動子質(zhì)粒,在體外合成與野生型DNA或RNA互補的32p標(biāo)記RNA探針,然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火, 所產(chǎn)生的單堿基錯配可用RNA酶A切割,通過凝膠電泳分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯配的位置。在所有各種可能的單堿基錯配中,大約50%可用此法確定。

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